詳解超聲波提取罐在蛋白提取生產中的應用 超聲波提取罐我們應該都不陌生,它是一種提取質量很高的設備,適合各種植物、動物等物質的提取,被廣泛應用于很多不同的領界,那么大家對于該設備在蛋白提取方面的事情了解嗎?下面就為大家介紹該提取設備在蛋白提取生產中的應用。
蛋白質的制備是一項十分細致的工作。涉及物理學、化學和生物學的知識很廣。近年來雖有了不少改進,但其主要原理仍不外乎兩個方面:
一是利用混合物中幾個組分分配率的差別,把它們分配于可用機械方法分離的兩個或幾個物相中,如鹽析、有機溶劑提取、層析和結晶等;
二是將混合物置于單一物相中,通過物理力場的作用使各組分分配于不同區域而達到分離的目的,如電泳、超離心、超濾等。由于蛋白質不能溶化,也不能蒸發,所能分配的物相只限于固相和液相,并在這兩相間互相交替進行分離純化。制備方法可按照分子大小、形狀、帶電性質及溶解度等主要因素進行分類。按分子大小和形態分為差速離心、超濾、分子篩及透析等方法;按溶解度分為鹽析、溶劑抽提、分配層析、逆流分配及結晶等方法;按電荷差異分為電泳、電滲析、等電點沉淀、離子交換層析及吸附層析等;按生物功能專一性有親合層析法等。
由于不同生物大分子結構及理化性質不同,分離方法也不一樣。即同一類生物大分子由于選用材料不同,使用方法差別也很大。因此很難有一個統一標準的方法對任何蛋白質均可循用。因此實驗前應進行充分調查研究,查閱有關文獻資料,對欲分離提純物質的物理、化學及生物學性質先有一定了解,然后再著手進行實驗工作。對于一個未知結構及性質的試樣進行創造性的分離提純時,更需要經過各種方法比較和摸索,才能找到一些工作規律和獲得預期結果。其次在分離提純工作前,常須建立相應的分析鑒定方法,以正確指導整個分離純化工作的順利進行。高度提純某一生物大分子,一般要經過多種方法、步驟及不斷變換各種外界條件才能達到目的。因此,整個實驗過程方法的優劣,選擇條件效果的好壞,均須通過分析鑒定來判明。
另一方面,蛋白質常以與其他生物體物質結合形式存在,因此也易與這些物質結合,這給分離精制帶來了困難。如極微量的金屬和糖對巨大蛋白質的穩定性起決定作用,若被除去則不穩定的蛋白質結晶化的難度也隨之增加。如高峰淀粉酶A的Ca2+,胰島素Zn2+等。此外,高分子蛋白質具有一定的立體構象,相當不穩定,如前所述極易變性、變構,因此限制了分離精制的方法。通常是根據具體對象聯用各種方法。為得到天然狀態的蛋白質,盡量采用溫和的手段,如中性、低溫、避免起泡等,并還要注意防腐。
注意共存成分的影響。如蝮蛇粗毒的蛋白質水解酶活性很高,在分離純化中需引起重視。純化蝮蛇神經毒素時,當室溫超過20℃時,幾乎得不到神經毒素。蝮蛇毒中的蛋白水解酶能被0.1mol/LEDTA*抑制,因此在進行柱層析前先將粗毒素0.1mol/LEDTA溶液處理,即使在室溫高于20℃,仍能很好的得到神經毒素。
整個制備過程一般可分為5個階段:
1、材料的選擇和預處理,
2、細胞的破碎(有時需進行細胞器的分離),
3、提取,
4、純化(包括鹽析,有機溶劑沉淀,有機溶劑提取、吸附、層析、超離心及結晶等),
5、濃縮、干燥及保存。以上5個階段不是要求每個方案都完整地具備,也不是每一階段截然分開。(具體可查看天宇超聲《中藥提取濃縮設備提取罐幾個提取方法》的相介紹)
不論是哪一階段使用哪一種方法,均必須在操作中保存生物大分子結構的完整性。保存活性防止變性及降解現象的發生。因空間結構主要依靠氫鍵、鹽鍵和范德華力的存在,遇酸、遇堿、高溫、劇烈的機械作用及強烈的輻射等均可導致活性喪失。因此選擇的條件應為十分溫和。同時應注意防止系統中重金屬離子、細胞自身酶系及其他有毒物質的污染。
以上就是超聲波提取罐在蛋白提取生產中的應用,希望能夠帶給大家一定的幫助,謝謝大家的觀看。